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Expression, Reinigung und molekulare Charakterisierung des Proteins ETHYLENE INSENSITIVE 2 (EIN2)
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Allekotte, Silke |
| Copyright Year | 2009 |
| Abstract | Das Phytohormon Ethylen ist in der Pflanze an der Regulation einer Vielzahl physiologischer Prozesse der Pflanzenentwicklung wie an der Kontrolle von Fruchtreife, Blattfall und anderen Senezenzprozessen beteiligt und spielt daher agrarokonomisch eine wichtige Rolle Molekulargenetische Studien in Arabidopsis thaliana haben zu der Entwicklung eines Modells fur die Signaltransduktion von Ethylen gefuhrt, in dem zwar die an der Signalwahrnehmung und Weiterleitung beteiligten Proteine identifiziert werden konnten, doch die molekularen Mechanismen der einzelnen Schritte der Signaltransduktion sind noch weitestgehend ungeklart blieben. Fur die Untersuchungen des zugrunde liegende Mechanismus kann jedoch nicht auf indirekte, genetische Methoden zuruckgegriffen werden, sondern sie erfordern Analysen zu Struktur und Funktion an isolierten Proteinen. Im Rahmen dieser Arbeit wurde ein Reinigungsprotokoll entwickelt, mit dem der putativ membran-extrinsische Bereich des EIN2-Proteins, der ca 63 % des Gesamtproteins ausmacht, in ausreichender Menge fur funktionelle Untersuchungen isoliert werden konnte. Eine erste strukturelle Charakterisierung des EIN2-Fragments wurde durch die Untersuchung der Sekundarstruktur mittels Zirkular Dichroismus (CD) Spektroskopie durchgefuhrt. In der vorliegenden Arbeit ist es erstmals gelungen, wichtige Hinweise auf die Funktion des EIN2 Proteins zu erhalten. In funktionellen Untersuchungen konnte sowohl mikrokalorimetrisch als auch fluoreszenzspektroskopisch die Bindung zweiwertiger Kationen an mindestens zwei verschiedenen Typen von Bindungsstellen nachgewiesen werden und somit ein Zusammenhang mit der postulierten Sensorfunktion des Proteins fur Metallionen hergestellt werden. Durch sequenzbasierte Suche fur Kalziumsbindungsstellen konnten sieben putative EF-hand-Motive in EIN2 479-1294 identifiziert werden. Die experimentell bestimmten Dissoziations-konstanten fur Kalzium und Magnesium unterstutzten einen postulierten Bindungs-mechanismus in EIN2 uber EF Hand-Motive. Ein weiteres Argument fur die Ionenbindung uber dieses Motiv sind die durch Kalziumionen induzierten Konformationsanderungen in a-helikalen Bereichen von EIN2 479-1294. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DerivateServlet/Derivate-11071/Dissertation_SilkeAllekotte.pdf |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
