Funktionelle und molekulare Charakterisierung des Ethylenrezeptorproteins ETR1 aus A. thaliana

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Vormizeele, Voet Van Hendrik, Jan Willem
Copyright Year	2006
Abstract	Der molekulare Mechanismus der Ethylenwahrnehmung und der Weiterleitung des Phytohormonsignals in Pflanzen durch den Ethylenrezeptor ETR1 ist weitgehend unklar. Fur das Verstandnis der Signalubertragung und der Steuerung der durch Ethylen ausgelosten Antworten spielt dessen Klarung aber eine zentrale Rolle. Statt mit indirekten, genetischen Methoden lasst sich die Frage nach dem Mechanismus nur durch direkte Untersuchungen der Funktion und der Struktur am isolierten, vollstandigen Protein beantworten. Zur Klarung dieser Fragestellung wurden in der vorliegenden Arbeit verschiedene Reinigungsstrategien entwickelt, um ETR1 in ausreichenden Mengen fur strukturelle und funktionelle Untersuchungen zur Verfugung zu stellen. Mit gereinigten ETR1 Protein wurden Untersuchung zur Sekundarstruktur mittels Zirkular Dichroismus (CD) Spektroskopie durchgefuhrt. Erste mit dem gereinigten Rezeptorprotein ergaben bislang noch keine streufahigen Kristalle. In funktionellen Untersuchungen konnte das in vivo beschriebene ETR1 Dimer in einem in vitro Reaktionsansatz mit gereinigtem, monomeren ETR1 Protein nachgewiesen werden. Untersuchungen zur Aktivitat der Histidinkinasedomane wiesen die Autokinaseaktivitat in Abwesenheit eines Ethylenreizes des kompletten ETR1 Rezeptorproteins nach. Erstmals wurde im Rahmen dieser Doktorarbeit eine Regulation der Aktivitat durch die Ethylenagonisten und –antagonisten Cyanid und MCP belegt. Es konnte gezeigt werden, dass die Bindungsstelle von Cyanid und MCP in der Membrandomane des ETR1 liegt und dass die Inhibierung der Aktivitat mit Cyanid durch die Verdrangung von MCP aus der Bindungsstelle verhindert werden kann. Neben der beschriebenen und primar beobachteten Phosphorylierung des Histidins in Position 353 konnte die Phosphorylierung weiterer Aminosaurereste belegt werden. Anhand eines Strukturmodells des loslichen Bereichs des ETR1 Rezeptor-proteins wurden mogliche alternative Phosphorylierungsziele ermittelt.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	https://docserv.uni-duesseldorf.de/servlets/DerivateServlet/Derivate-3448/1448.pdf
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article