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Rôle de la partie C-terminale de la protéine UL24 du virus de l'herpès simplex 1 dans le trafic intracellulaire
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Suarez, Gonzalez Teresa Elena, Carmen Prada |
| Copyright Year | 2014 |
| Abstract | Le gene viral UL24 du virus de l'herpes simplex 1 (VHS-1) est conserve parmi tous les virus de la famille des Herpesviridae. La proteine UL24 contient une partie N-terminale qui est hautement conservee parmi les orthologues de cette proteine dans divers virus herpes. Plusieurs etudes ont demontre l'importance d'acides amines hautement conserves dans la partie N-terminale d'UL24 dans les modifications nucleolaires induites par le VHS-1 et dans la pathogenese dans un modele murin d'infection oculaire. En revanche, la partie C-terminale d'UL24 est pauvrement conservee, et son role durant l'infection n'est pas encore determine. Des resultats anterieurs ont demontre que lorsqu'exprimee seule, la partie C-terminale d'UL24 se retrouve au Golgi en contexte de transfection transitoire. Notre hypothese est qu'il y a des residus dans la partie C-terminale d'UL24 qui sont importants pour la localisation et les fonctions de la proteine dans le cytoplasme. Une serie de vecteurs d'expression mammifere encodant UL24 du VHS-1 avec des deletions dans la partie C-terminale ont ete produits. De maniere interessante, il a ete observe que plusieurs formes deletees d'UL24 se localisent majoritairement dans le noyau en contexte de transfection transitoire de cellules COS-7. En analysant la sequence primaire de la partie C-terminale de la proteine UL24, il a ete trouve que le residu T195 correspond a un site putatif de phosphorylation et la region comprise entre les acides amines 250 et 258 correspond a un possible signal d'export nucleaire (NES). La mutagenese dirigee ciblant des residus predits a faire partie d'un NES (L253, F254, V256, V258) a significativement augmente la localisation nucleaire d'UL24 dans les cellules COS-7 transfectees, suggerant que cette proteine peut faire la navette entre le noyau et le cytoplasme du a la presence d'un NES identifie dans la partie C-terminale de la proteine; cependant, l'export nucleaire d'UL24 n'a pas eu d'impact sur la distribution de la nucleoline. Pour determiner l'importance de l'export nucleaire de la proteine UL24 pendant l'infection, des virus recombinants contenant des mutations ponctuelles dans UL24 du VHS-1 ont ete produits en utilisant le systeme « Bacterial Artificial Chromosome » (BAC). Il a ete observe que dans les cellules infectees par le virus possedant des mutations dans le NES, la proteine UL24 est seulement detectee dans le noyau. Quoique la leptomycine B (LMB), un inhibiteur de l'export nucleaire dependant de CRM-1 (exportine 1), bloque l'export nucleaire d'UL24 en contexte de transfection, le traitement des cellules infectees avec la LMB n'a pas eu d'effet sur la localisation d'UL24. Cela suggere que l'export nucleaire d'UL24 du VHS-1 se fait de facon independante de cette exportine ou il peut avoir de la redondance avec d'autres voies d'export. Par ailleurs, il a ete observe que le virus possedant des mutations dans le NES d'UL24 a produit de gros syncytia comparables a ceux d'un virus deficient en UL24. Cependant, il n'a pas ete observe de differences dans sa replication virale en comparaison au virus de type sauvage. Ces resultats ont mis en evidence la presence d'un NES dans la partie C-terminale de la proteine UL24 du VHS-1 et cette propriete nouvellement decouverte pourrait jouer un role dans le contexte d'infection virale particulierement dans les etapes tardives de la morphogenese virale dans le cytoplasme. Abstract The UL24 gene of herpes simplex virus 1 (HSV-1) is conserved among all Herpesviridae members. The UL24 protein contains an N-terminal portion that is highly conserved between the orthologs of this protein in other Herpesviridae. Previous studies showed the importance of several conserved amino acids in the N-terminus of UL24 for nucleolar modifications induced by HSV-1 as well as for pathogenesis in a mouse model of ocular infection. In contrast, the C-terminal domain of UL24 is poorly conserved and when expressed alone accumulates in the Golgi apparatus; however, its role during HSV-1 infection is unknown. Herein, we tested the hypothesis that there are residues in the C-terminal domain of UL24 that are important for the localisation and the functions of the protein in the cytoplasm. A series of mammalian expression vectors encoding UL24 of HSV-1 with nested deletions in the C-terminal domain were generated. Interestingly, in transient transfection experiments a pronounced nuclear staining was observed in COS-7 cells for several UL24 deleted forms. Examination of the primary sequence of the C-terminus portion of UL24 revealed that the amino acid T195 corresponds to a putative site of phosphorylation and the region between the amino acids 250 and 258 corresponds to a possible nuclear export signal (NES). Site directed mutagenesis targeting residues predicted to make up an NES (L253, F254, V256, V258) significantly enhanced nuclear localisation of the full length protein in transfected COS-7 cells suggesting that this protein is able to shuttle between the nucleus and the cytoplasm due to the presence of the NES; however, blocking the nuclear export of UL24 had no impact on the distribution of nucleolin. To determine the importance of this function during infection, recombinant viruses were generated by introduction of point mutations into the HSV-1 genome cloned as a Bacterial Artificial Chromosome (BAC). It was observed that infection with a virus that encodes UL24 harboring substitutions in the NES led to accumulation of UL24 in the nucleus. Leptomycin B (LMB), an inhibitor of CRM-1-dependent nuclear export blocked nuclear export of UL24 in transfected cells; however, in infected cells, LMB did not have an effect on the localisation of UL24 protein. This result suggests that either UL24 nuclear export is independent of CRM-1 or that there is redundancy with other export pathways. A virus that encodes a UL24 protein with mutations on the NES resulted in a syncytial phenotype similar to that observed for a virus that lacks UL24 (UL24X). Nevertheless, unlike UL24X, replication of this virus was not distinguishable from that of the corresponding wild type strain. In summary, we discovered a NES in the C-terminal portion ofthe HSV-1 UL24 protein. This newly discovered property may play a role in the context viral infection, particularly in the latter stages of viral morphogenesis in the cytoplasm. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | http://espace.inrs.ca/2745/1/D%C3%A9p%C3%B4t%20final%20de%20Gonzalez%20Suarez,%20Carmen%20Elena.pdf |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
