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Etude de la régulation de l'expression des gènes par un ARN antisens
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Denoeux, Stanislas |
| Copyright Year | 2015 |
| Abstract | Au cours de la derniere decennie, les avancees du sequencage a haut debit ont permis de caracteriser un grand nombre d’ARN non codant et d’etablir l’existence de transcrits “antisens” pour de nombreux genes chez les mammiferes. Cependant leur role dans le controle de l’expression des genes “sens” auxquels ils sont associes est encore tres mal connu. Mes travaux ont porte sur la caracterisation de certains aspects du mecanisme d’action des longs ARN non codants. Ils reposent sur le developpement d’une approche de constructions indicatrices fluorescentes dont l’expression est suivie par cytometrie en flux en presence ou non d’ARN “antisens”. Cette approche a le potentiel de mettre en evidence une regulation meme si elle n’est presente que dans une sous population cellulaire. Une premiere serie d’experiences a ete realisee en expression transitoire pour beneficier d’un contexte chromatinien simplifie. Mais dans ce cas les silencing observes sont aussi actifs sur une construction controle, indiquant la mise en place d’une reponse non specifique de sequence qui evoque la reponse de type interferon. Cependant, l’expression globale des genes cellulaire n’est pas significativement affectee, indiquant une certaine specificite de la reponse. Parmi les voies testees ni la kinase PKR, ni la RNaseL ou la voie de l’interference par l’ARN ne peuvent rendre compte du silencing observe. Une des caracteristiques de cette regulation est qu’elle n’affecte pas les genes integres au genome mais uniquement les genes exprimes a partir d’une construction episomale ce qui evoque des caracteristiques souhaitables pour un mecanisme antiviral. Cependant l’ampleur de cette reponse non specifique empeche toute etude plus approfondie d’un mecanisme specifique s’il existe. Mes travaux se sont alors portes sur l’etude de ces memes constructions en clone stable dans deux contextes differents pour l’expression de l’ARN antisens ; en cis ou en trans. Dans le cas de l’expression en trans, un ARN antisens sans sequence regulatrice particuliere ne permet pas la mise en place d’un silencing. Cette observation est en accord avec le faible nombre de longs ARN antisens connus pour agir en trans dans la nature. Par contre l’expression en cis d’un ARN antisens peut conduire a un silencing specifique. Cette organisation dans laquelle les genes « sens » et « antisens » sont situes sur le meme fragment d’ADN correspond a celle majoritairement observee pour les longs ARNs antisens dans la nature (cisNAT, cis Natural Antisense Transcripts). Cependant, mes travaux montrent que le silencing observe n’est pas stable dans le temps et disparait des lors que la transcription antisens cesse, indiquant l’absence d’une memoire epigenetique. Un tel mode de regulation est compatible avec une interference transcriptionnelle dans laquelle la transcription et non le produit ARN est la cause du silencing. Par ailleurs, j’ai observe un certain nombre de cas de co-regulation du transcrit sens et antisens ce qui traduit la possibilite d’activer en cis la transcription du gene cible par le promoteur de son ARN antisens. Ce phenomene est probablement facilite par la petite taille de nos constructions, mais cette dualite de reponse est en accord avec l’absence de correlation (positive ou negative) entre l’expression des genes et de leur transcrits antisens. L’ensemble de mes travaux montrent la faible capacite d’un ARN antisens a induire un silencing. L’approche developpee doit donc permettre de rechercher des co-activateurs du silencing, par exemple en introduisant des sites de recrutement de complexes modificateurs de la chromatine. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01276303/document |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
