Aufbau eines Mikrobleichsystems an der GSI Schwerionen-Mikrosonde und dessen biologische Anwendungen

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Merk, Bruno
Copyright Year	2013
Abstract	Diese Arbeit beschaftigt sich mit dem Aufbau und der Integrierung eines Lasersystems zur Untersuchung der Austauschkinetik fluoreszenzmarkierter Ku80 Reparaturproteine an strahleninduzierten DNA Schadigungen, welche durch gezielte Ionenbestrahlung mittels der Schwerionen-Mikrosonde der GSI erzeugt werden. Zur Messung dieser schnellen Austauschkinetik, mit wenigen Sekunden Halbwertszeit, muss auch die raumliche und zeitliche Auflosung des dedizierten in-situ Mikroskopes verbessert werden. Diese Verbesserungen erlauben es, dass die zuvor nur ex-situ beobachtbare Dekondensation von heterochromatischen Bereichen mit dichter DNA nun auch in-situ beobachtet werden kann und zusatzlich speziesubergreifend nachgewiesen wird. Bei der Reparatur von Doppelstrangbruchen entlang des Reparaturmechanismus der „Nicht Homologen Endverknupfung“ spielt Ku80 eine entscheidende, fruhe Rolle. Durch die gezielte Bestrahlung von Zentren unterschiedlicher Chromatindichte kann mit dem verbesserten Mikroskop der Mikrosonde gezeigt werden, dass Ku80-GFP fur die Akkumulation in Heterochromatin (HC) signifikant langer benotigt als in Euchromatin (EC). Im Rahmen der Untersuchung des Austausches von Ku80-GFP in diesen geschadigten Bereichen von HC und EC wird das Lasersystem genutzt, um gezielt die lokale Fluoreszenz durch Bleichen zu deaktivieren und den Austausch von gebleichten durch benachbarte ungebleichte Ku80-GFP Molekulen aufzunehmen. Diese Methode ist als FRAP (Fluorescence Recovery after Photobleaching) bekannt. Dabei zeigt sich, dass der Austauschvon Ku80-GFP im dichten HC langsamer als im weniger dichten EC stattfindet.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	http://tuprints.ulb.tu-darmstadt.de/3488/1/Dissertation_Bruno_Merk.pdf
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article