CGE-LIF pour cartographie des glycanes : amélioration de méthode et création d'une base de données des N-glycanes

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Ulrich, Pauline
Copyright Year	2015
Abstract	La plupart des medicaments biopharmaceutiques sont des glycoproteines dont les proprietes intrinseques sont fortement dependantes de leur profil de glycosylation. La glycosylation pouvant impacter l’activite proteique, la stabilite et la demi-vie in vivo, elle est devenue un attribut qualite crucial a controler au cours du developpement biotechnologique. Cependant, l’elucidation structurelle des glycanes, dont les structures sont tres heterogenes, represente un defi analytique. L’electrophorese capillaire de gel avec fluorescence induite par laser (CGE-LIF) est une technique analytique utilisee pour le criblage a haut debit de differents types de glycanes digeres et de leur distribution. Les profils de glycosylation ainsi obtenus sont hautement reproductibles et l’analyse permet de quantifier tous les N-glycanes majeurs, y compris les isomeres. Grâce a la mise en place d’une nouvelle methode de traitement des donnees et a une modification de la preparation des echantillons, le traitement des donnees est desormais plus rapide et les temps de migration harmonises : un glycane donne elue dorenavant toujours au meme temps de migration quelle que soit la proteine analysee. La gamme de travail de la methode a ete evaluee en termes de linearite, de precision et de justesse. Les gammes de quantite de proteine a etre chargee et d’intensite de pic maximale ont ete definies dans le but d’assurer des resultats lineaires et robustes. Afin de faciliter le dechiffrage du glyco-puzzle, une base de donnees rassemblant 64 N-glycanes frequemment rencontres dans les proteines therapeutiques a ete construite. Cette base de donnees permet une identification semi-automatique des N-glycanes basee sur leur temps de migration, calibre sur les temps de migration connus de fragments d’ADN. Les ameliorations mises en place rendent la methode de CGE-LIF plus rapide et plus precise, que ce soit pour le suivi de la glycosylation ou pour l’identification de N-glycanes dans de nouvelles proteines therapeutiques en developpement.
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File Format	PDF HTM / HTML
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Language	English
Access Restriction	Open
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Resource Type	Article