Analyse du transport intracytoplasmique de la capside du virus de l’hépatite B : analyse des interactions entre les capsides du VHB et les chaînes du complexe de la dynéine

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Osseman, Quentin
Copyright Year	2014
Abstract	Le virus de l’hepatite B (VHB) utilise la machinerie transcriptionnelle nucleaire pour sa replication. Le genome viral est transporte de la peripherie cellulaire a l’enveloppe nucleaire. Generalement, ce transport intracytoplasmique retrograde est facilite par le reseau de Mt via l’utilisation du complexe moteur de la dyneine. Nous avons montre que le transport des capsides du VHB depend des Mt, ce qui permet l’adressage des capsides aux complexes du pore nucleaire (NPC) ; lequel est requis pour l’etape de liberation du genome de la capside dans le noyau.Dans cette etude, nous avons utilise des capsides provenant de virus recuperes dans du surnageant de HepG2.2.15, qui contiennent le genome mature partiellement double brin (capsides matures), et des capsides exprimees chez E.coli. Ces dernieres sont utilisees telles quelles, capsides E.coli contenant de l’ARN, ou bien sont utilisees pour preparer des capsides vides. Apres microinjection dans des ovocytes de Xenopus laevis, nous avons observe que les capsides vides et les capsides matures sont transloquees aux NPC avec une cinetique similaire. Les capsides contenant de l’ARN ne sont pas identifiees aux NPCs ce qui implique que le transport des deux autres types de capsides est actif. Cela a ete confirme par la pre-injection d’anticorps anti tubuline qui neutralisent le transport assure par les Mt.L’attachement specifique des capsides matures et vides aux Mt a ete confirme en utilisant des Mt polymerises in vitro, nous avons montre que cette interaction necessitait des proteines cytosoliques. En utilisant des experiences de coimmunoprecipitation et de cosedimentation nous avons identifie une chaine legere de la dyneine (DynLL1 membre de la famille Lc8) comme partenaire des capsides. Dans les experiences de microinjection, la comicroinjection d’un exces de DynLL1 avec les capsides inhibe leur transport vers les NPCs, indiquant que DynLL1 est impliquee dans le transport actif des capsides.DynLL2 qui n’interagit pas avec les capsides differe de DynLL1 de seulement six acides amines. Par mutagenese dirigee de DynLL1, nous avons montre l’implication de deux acides amines dans l’interaction directe avec les capsides. Ces deux acides amines sont presents a la surface du dimere de DynLL1 et absents dans le sillon resultant de la dimerisation de DynLL1, sillon implique dans l’interaction avec la DynIC. Nous avons partiellement reconstitue le complexe DynIC, DynLL1 et capsides vides qui doit en partie refleter la situation in vivo.
File Format	PDF HTM / HTML
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Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article