Sub-clonagem, expressão e caracterização de módulo aberto de leitura alternativo de proteína salivar rica em glicinas do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Ferreira, C. A. S. Soares, Natasha Ruschel
Copyright Year	2011
Abstract	O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o mais importante ectoparasita de rebanhos bovinos. Sua ação causa inúmeros danos aos bovinos, sendo necessário para seu controle o uso de acaricidas que, além de serem tóxicos aos humanos e aos bovinos, geram indivíduos resistentes conforme o tempo de uso. Por isso, torna-se necessária a busca por alternativas, tais como vacinas. Entre os possíveis alvos estão antígenos presentes na saliva do carrapato, que possui propriedades que facilitam a alimentação do parasita. O cDNA correspondente a uma proteína rica em glicina, presente na glândula salivar do carrapato, foi isolado por nosso grupo de pesquisa e sua caracterização é essencial para avaliar se codifica para um antígeno potencialmente protetor, pois proteínas ricas em glicina já foram descritas como protetoras quando testadas como imunógeno em hospedeiros de carrapatos. A partir de análises iniciais, verificou-se a existência de um módulo alternativo de leitura no cDNA isolado. A clonagem e expressão deste módulo alternativo de leitura são importantes para avaliar se um mesmo gene pode codificar proteínas diferentes presentes na saliva do R. microplus e, em caso afirmativo, quais suas funções e relevância no relacionamento parasitohospedeiro. Para a amplificação do cDNA codificante ao módulo alternativo de leitura de uma proteína rica em glicinas, foram desenhados oligonucleotídeos iniciadores diretos e reversos que possuem uma cauda de histidina para a posterior purificação da proteína recombinante. A amplificação do fragmento foi obtida através de PCR com Pfu DNA polimerase e verificação em gel de agarose 2% apresentando uma banda correspondente a um fragmento de aproximadamente 360pb. Recentemente foi realizada a reação de clonagem de acordo com o kit ChampionTM pET101 Directional TOPO® Cloning, incluindo a posterior
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	http://ebooks.pucrs.br/edipucrs/anais/seminarioic/Ciencias_Biologicas/Imunologia/Imunologia_Aplicada/95318-NATASHA_RUSCHEL_SOARES.pdf
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article