Expression et caractérisation de la lipoxygénase recombinante d'olive : une enzyme présentant une double spécificité d'hydroperoxydation et exprimée dans les derniers stades de développement des fruits.

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Palmieri-Thiers, Cynthia
Copyright Year	2008
Abstract	Les lipoxygenases (LOXs, EC 1.13.11.12) sont des dioxygenases qui catalysent l'hydroperoxidation des acides gras polyinsatures. Bien que de nombreuse isoformes de LOXs aient ete caracterise chez de nombreux vegetaux, leur role physiologique reste inconnu. Dans le but d'eclaircir le role des LOXs dans l'olive et leur contribution dans l'elaboration de l'arome, nous avons clone et caracterise un ADNc codant pour une isoforme de LOX d'olive exprime dans les derniers stades de maturation du fruit. Cet ADNc presente un cadre de lecture ouvert qui code pour une proteine de 864 acides amines. Cette LOX d'olive fait partie des LOXs de type-1 et presente un fort pourcentage d'identite avec la LOX de noisette (77,3%) et la LOX de tabac (76,3%). L'enzyme recombinante presente une double specificite, elle produit des 9- et des 13-hydroperoxydes dans un rapport 2:1. Bien que l'activite LOX soit detectee a tous les stades de developpement des olives, la 9/13-LOX est uniquement exprime dans les stades noirs. Nos resultats suggerent qu'il existe au moins deux genes lox exprimes dans les olives noires, et que la 9/13-LOX est associe aux phenomenes de maturation et de senescence. Cependant, en considerant sa double specificite de substrat et son profil d'expression, nous ne pouvons pas exclure que cette enzyme puisse jouer un role dans l'elaboration de l'arome. Nous avons modifie l'accessibilite au site actif de la LOX d'olive en mutant les residus Phe277 et Tyr280 situes a l'entree du site actif par des residus a chaine laterale courte (Ala et Ile). Nous avons exprime les mutants F277A, Y280I et F277A/Y280I chez E. coli et nous les avons partiellement purifie. Les mutants F277A et F277A/Y280I presentent un taux de conversion de l'acide linoleique 4 fois superieur a celui de la LOX d'olive non mutee et ont des parametres cinetiques similaires a la LOX1 de soja.
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Language	English
Access Restriction	Open
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Resource Type	Article