Fidélité de la terminaison de la traduction chez les eucaryotes

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Blanchet, Sandra
Copyright Year	2014
Abstract	La terminaison de la traduction se produit lorsqu’un codon stop entre au site A du ribosome ou il est reconnu par le facteur de terminaison eRF1 accompagne du facteur eRF3. Cette etape de la traduction est encore mal comprise chez les eucaryotes. Au cours de ma these je me suis interessee a l’etude de la fidelite de la terminaison de la traduction afin de mieux comprendre et caracteriser les mecanismes moleculaires mis en jeu lors du decodage du codon stop.L’un de mes projets consistait a mieux caracteriser une region du domaine N-terminal d’eRF1, la cavite P1, identifiee comme etant impliquee dans l’efficacite de terminaison. Grâce a une quantification de l’efficacite de translecture de mutants de la cavite P1, j’ai pu mettre en evidence le role de residus cles comme les serines 33 et 70, impliquees dans le decodage specifique du codon UGA probablement via une interaction directe entre les deux residus, ou encore l’arginine 65 et la lysine 109, essentielles pour une terminaison efficace sur les trois codons stop. L’analyse par RMN de ces mutants a egalement permis de montrer que ces residus etaient importants pour la conformation correcte de la cavite et potentiellement impliques dans une interaction directe avec l’ARNm. La combinaison des donnees genetiques et structurales nous a permis de proposer un modele d’interaction entre l’ARNm et le facteur de terminaison eRF1 dans lequel le codon stop serait reconnu en partie par l’intermediaire de la cavite P1. Dans la cellule, la terminaison est toujours en competition avec la translecture, qui correspond a l’incorporation d’un ARNt proche-cognat au niveau du codon stop. Afin d’identifier les acides amines incorpores par translecture au niveau du codon stop, j’ai mis au point un systeme base sur l’expression et la purification de proteines issues de la translecture qui sont ensuite analysees par spectrometrie de masse. J’ai pu mettre en evidence que la glutamine, la tyrosine et la lysine s’incorporent au niveau des codons UAA et UAG, alors que le tryptophane, la cysteine et l’arginine sont retrouves au niveau du codon UGA. J’ai egalement pu montrer que le contexte en 5’ n’influencait pas l’incorporation des acides amines au codon stop mais qu’en revanche, la presence de la paromomycine avait un impact sur la selection des ARNt suppresseurs naturels. Ce projet permet d’apporter de nouvelles informations sur les regles de decodage grâce a l’analyse des appariements entre codons stop et anticodons des ARNt naturels suppresseurs. Il permet egalement d’envisager des perspectives therapeutiques dans le cadre des maladies liees a la presence d’un codon stop premature et pour lesquelles le traitement repose sur l’utilisation de la translecture afin de re-exprimer des proteines entieres.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01599233/document
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article