Avaliação De Técnicas Alcalinas De Extração De Dna Em Amostras De Sêmen De Ovinos Da Raça Santa Inês

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Ribeiro, Mariana Da Silva Junior, Aylton Bartholazzi Pacheco, Aline Quirino, Célia Raquel Menassa, Dévanny Weller Ferreira
Copyright Year	2013
Abstract	A biologia molecular, por meio da manipulacao do DNA, tem grande contribuicao para estudos relacionados ao melhoramento genetico animal. A extracao de DNA e uma importante etapa no processo de identificacao genotipica. Varios sao os metodos que podem ser empregados para a extracao do DNA, que pode ser obtido atraves de amostras de tecidos e fluidos corporais. Amostras pereciveis, como o semen, devem ser armazenadas adequadamente ate o processo de extracao. Este trabalho teve o objetivo de avaliar a viabilidade de amostras de semen armazenadas a 4oC para extracao de DNA utilizando tres tecnicas alcalinas. Para as extracoes de DNA foram utilizadas amostras de semen de tres ovinos da raca Santa Ines. Em cada macho foi utilizada a coleta de semen com vagina artificial. Logo apos a coleta foi realizada uma extracao de DNA e posteriormente as amostras de semen foram refrigeradas a 4oC por 6, 24, 30 e 48 horas. Em cada periodo de tempo foi realizada uma extracao de DNA. Foi realizada extracao alcalina rapida com semen total e com semen centrifugado, e extracao alcalina com semen tratado com citrato de sodio. Para as extracoes foram utilizadas solucao de lise (192,5 mM de NaOH) e solucao neutralizante (200 mM de HCL e 100 mM de Tris HCL). Apos a extracao, as amostras passaram por uma analise qualitativa e quantitativa, realizada pelo espectrofotometro (NanoDrop 2000c). Para comprovar a eficiencia da extracao, as amostras foram submetidas a amplificacao do DNA pela tecnica da PCR, atraves da amplificacao do locus IRNA63. Verificou-se diferenca entre protocolos, sendo que o protocolo rapido com semen centrifugado apresentou a maior concentracao, seguido pelo protocolo alcalino rapido com semen total e o protocolo alcalino com citrato de sodio foi o que obteve menor concentracao. Tanto na pureza proteica quanto na pureza de sais os protocolos alcalinos rapidos apresentaram medias semelhantes quando comparadas a do protocolo alcalino com citrato de sodio, que foi maior na concentracao proteica e menor na de sais, resultando em amostras mais puras. Nao houve diferenca na media das concentracoes quando comparados os tempos de armazenamento. Conclui-se que as amostras de semen conservadas a 4oC por ate 48 horas podem ser utilizadas para extracao de DNA, que por serem praticas, rapidas e de baixo custo, as tecnicas alcalinas sao ideais para uso rotineiro em laboratorio.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	http://www.essentiaeditora.iff.edu.br/index.php/confict/article/download/4225/2368
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article