Etudes par RMN des L,D-transpeptidases bactériennes : structure, dynamique et compréhension de leur inhibition par les beta-lactames

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Lecoq, Lauriane
Copyright Year	2012
Abstract	L'etape finale de biosynthese du peptidoglycane est catalysee par les D,D-transpeptidases (PBPs), l'une des cibles principales des antibiotiques de type beta-lactame. Recemment, il a ete montre qu'une nouvelle classe d'enzymes, les L,D-transpeptidases (LDts), permet de contourner l'inhibition des PBPs. Ces LDts ont ete identifiees tant dans des bacteries resistantes aux beta-lactames que dans des formes dormantes de Mycobacterium tuberculosis. Les seuls beta-lactames capables de les inhiber, les carbapenemes, forment une liaison covalente avec la cysteine catalytique des LDts. Ni le mecanisme de cette inactivation, ni la specificite de ces enzymes pour les carbapenemes ne sont toutefois expliques a ce jour. Le but du present travail consiste en l'investigation par RMN du mecanisme d'acylation des LDts par ces antibiotiques. Dans ce contexte, la premiere partie de cette these s'interesse a la comprehension actuelle de l'emergence de ce phenomene de resistance. La seconde partie traite des principes de la RMN et des implementations developpees pour etudier la structure, la thermodynamique et la dynamique des LDts. La troisieme et derniere partie demontre le succes de l'approche RMN dans l'etude des diverses etapes de la reaction d'acylation, a travers une etude detaillee de l'apoenzyme, de complexes non covalents avec differents beta-lactames, et de l'enzyme acylee par un carbapeneme. Au cours de cette etude, la structure du site actif de l'apoenzyme de Bacillus subtilis a ete affinee par rapport a une etude cristallographique anterieure. Pour cette enzyme et son pendant chez Enterococcus faecium, nous avons demontre que la specificite pour les carbapenemes n'intervient pas au stade de la formation du complexe non covalent. Pour finir, la formation de la liaison covalente entre LDt et carbapeneme induit un rearrangement conformationnel substantiel et une augmentation de la flexibilite de l'enzyme.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	https://tel.archives-ouvertes.fr/file/index/docid/819829/filename/31547_LECOQ_2012_archivage1.pdf
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article