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Développement et applications de protocoles de synthèse in vitro du canal mécanosensible bactérien à large conductance, pour son étude structurale par résonance magnétique nucléaire en phase solide
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Abdine, Alaa |
| Copyright Year | 2011 |
| Abstract | Le genome de differents organismes contient pres de 30% de sequences codantes pour des proteines membranaires. Celles-ci sont impliquees dans des processus biologiques tels que la signalisation cellulaire, la transduction energetique ou le transport des metabolites. Cependant, leur etude structurale se heurte souvent aux problemes de surexpression, ainsi qu'aux differents inconvenients lies a leur extraction de leur environnement natif. Le canal mecanosensible a large conductance MscL d'Escherichia coli est une proteine intrinseque de la membrane interne de la bacterie. L'activite de cette proteine est fortement dependante de la membrane ; en effet, le canal s'ouvre lorsque la pression au niveau de la membrane augmente, lors d'un choc hypoosmotique, relarguant de l'eau et differents substrats afin que la bacterie retrouve un etat osmotique adequat a sa survie. Il est donc essentiel de recueillir des donnees structurales de la proteine dans son environnement natif. Pour cela, nous proposons une etude structurale de la proteine par resonance magnetique nucleaire en phase solide. La surexpression de la proteine et son marquage aux isotopes 13C et 15N sont deux etapes cles d'un tel projet. Une surexpression bacterienne et un marquage uniforme de la proteine ont ete effectues. Les donnees spectrales obtenues montrent une bonne resolution, mais l'imbrication des correlations ne permet pas d'en extraire des donnees structurales. Afin de reduire le nombre de residus marques, un marquage specifique a ete applique par la voie de la synthese in vitro. Le premier test a montre que l'approche permettait de reduire le temps d'acquisition, tout en diminuant la quantite d'informations. Differentes methodes ont ensuite ete appliquees pour trouver les meilleures combinaisons d'acides amines a marquer specifiquement en synthetisant la proteine in vitro. Ces approches utilisent les programmes de prediction de deplacements chimiques ou l'analyse de la sequence a la recherche de paires d'acides amines uniques. Une approche combinatoire a ete egalement testee. Les differents echantillons synthetises ont montre une bonne resolution, et ont permis l'identification de plusieurs correlations. Les methodes developpees au cours de ce travail pourront aider progressivement a determiner la structure de la proteine MscL. Elles pourront egalement servir a d'autres proteines membranaires pour leur etude par resonance magnetique nucleaire. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00621192/file/PreI_sentation-290611.pdf |
| Alternate Webpage(s) | https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00621192/document |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
