Caracterização de uma proteína rica em glicinas e da paramiosina do carrapato Rhipicephalus microplus

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Leal, Bruna Ferreira
Copyright Year	2017
Abstract	O Rhipicephalus microplus e um carrapato que infesta preferencialmente bovinos, causando um grande prejuizo a pecuaria. O principal metodo de controle e o uso de acaricidas, os quais selecionam populacoes resistentes, alem de aumentar o custo e o risco de contaminacao da carne, do leite e do ambiente. Desta forma, antigenos vacinais tem sido identificados e caracterizados como alternativa aos acaricidas. Moleculas salivares de parasitos hematofagos podem inibir respostas associadas a homeostase e modular o sistema imune do hospedeiro e, portanto, sao opcoes na busca por vacinas anti-carrapato. Neste contexto, este trabalho caracterizou uma proteina rica em glicinas e a paramiosina do R. microplus. Proteinas ricas em glicinas sao secretadas na saliva e sao essenciais na fixacao e na alimentacao do parasito. Ja a paramiosina e capaz de evadir o sistema imune do hospedeiro e mostrou-se um importante alergeno em acaros e antigeno vacinal contra helmintos. As sequencias de cDNA e aminoacidos da proteina rica em glicinas de R. microplus (RmPRG) foram identificadas e analisadas, revelando duas porcoes distintas da proteina (com glicinas isoladas ao longo da regiao N-terminal e padroes repetidos contendo glicinas ao longo da regiao C-terminal). A clonagem, expressao e purificacao da RmGRP foram realizadas e a proteina recombinante foi testada quanto ao reconhecimento por soros de bovinos naturalmente e experimentalmente infestados, indicando a sua antigenicidade, mas tambem uma alta heterogeneidade no reconhecimento da proteina entre individuos e entre infestacoes no mesmo individuo. Alem disso, a RmGRP recombinante foi reconhecida pelos soros de coelhos imunizados com saliva e glândula salivar de femeas parcialmente e totalmente ingurgitadas e ovos, mas nao por soros de coelhos imunizados com intestino. A expressao do gene codificante para a RmGRP (rmgrp) em diferentes tecidos de femeas e fases do desenvolvimento do carrapato foi avaliada por qRT-PCR. A transcricao do gene foi encontrada em ovos, larvas, machos adultos, alem de glândulas salivares, corpos gordurosos e ovarios de femeas parcialmente e totalmente ingurgitadas, apresentando os maiores niveis de expressao nas larvas de 1 dia e nas glândulas salivares de femeas totalmente ingurgitadas. rmgrp nao foi expresso nos ovos de 3 e 6 dias e no intestino de femeas parcialmente e totalmente ingurgitadas, corroborando o resultado anterior. Ainda foram avaliados os efeitos do silenciamento do RNAm correspondente a RmGRP e a RmPRM, o que resultou na reducao da taxa de postura de ovos no grupo em que o gene da RmPRM foi silenciado e da eclosao de larvas em femeas tratadas nos dois grupos. Portanto, sugere-se que as duas proteinas sao importantes durante o desenvolvimento larval, mas so a RmPRM seja necessaria na formacao e/ou postura dos ovos. Tambem foi realizada a 8 clonagem da regiao codificante e expressao dos fragmentos N-terminal, interno e C-terminal da paramiosina de R. microplus (RmPRM) em E. coli e da RmPRM completa em P. pastoris, sendo confirmadas por SDS-PAGE e western-blot. A partir dos dados obtidos, ambas RmGRP e RmPRM apresentam caracteristicas que fazem delas possiveis candidatas a comporem uma vacina coquetel contra o R. microplus.
File Format	PDF HTM / HTML
Alternate Webpage(s)	http://tede2.pucrs.br/tede2/bitstream/tede/7707/2/TES_BRUNA_FERREIRA_LEAL_CONFIDENCIAL.pdf
Language	English
Access Restriction	Open
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Resource Type	Article