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Développement d'un bioprocédé continu couplant la production et la purification d'un anticorps recombinant
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Maria, Sophie Di |
| Copyright Year | 2017 |
| Abstract | Les anticorps monoclonaux sont une classe de bio medicaments en plein essor. Leur production est largement etudiee afin d’obtenir des rendements de plus en plus eleves et de reduire les couts. Cette these decrit le developpement d’un procede complet en continu, de la production d’anticorps recombinants par des cellules mammiferes jusqu’a leur purification. L’objectif est de coupler la culture cellulaire en mode perfusion a la purification par chromatographie semi-continue. Le developpement du procede se fait en bioreacteur avec une lignee de cellules d’ovaires de hamster chinois (CHO-DP12) transformee pour produire un anticorps anti-Interleukine 8 utilisee, comme modele. Apres adaptation, les cellules ont ete cultivees en mode batch afin de connaitre le comportement de la lignee en environnement controle. Ensuite, un procede de perfusion de 2L de culture avec recyclage cellulaire a ete mis en place. Le principal enjeu est de maintenir un etat stationnaire avec une concentration cellulaire constante et determiner le debit optimal d’alimentation specifique par cellule (CSPR). Plusieurs methodes ont ete testees et comparees pour la determination de ce CSPR optimal. Le procede de culture en perfusion a ensuite ete maintenu pendant 24 jours a des concentrations cellulaires de 10, 20 et 40 millions de cellules par mililitres. Les anticorps produit par differents modes de culture ont ete caracterises (batch, fed-batch et perfusion). Les N-glycosylations, les variants de charge ainsi que la thermo-stabilite des anticorps ont ete etudies. Les resultats montrent que les anticorps produits presentent des caracteristiques similaires quel que soit le mode de production.Pour la purification, une etude preliminaire a permis de caracteriser le comportement du filtrat sur la resine chromatographique d’affinite MabSelect Sure LX en chromatographie classique. Un procede semi-continu a ete simule grâce au logiciel BioSC® Predict puis teste et optimise sur le chromatographe BioSC®. Il comprend la purification de l’anticorps mais aussi les etapes de nettoyages et de sanitisation. Un premier essai de couplage production/purification a pu etre realise avec succes pendant 32h et a permis d’obtenir un niveau de purete similaire a la chromatographie classique. La productivite a ete augmentee de 23% (en grammes d’anticorps purifie par litre de resine et par jour) et le volume de tampon utilise a ete reduit de 25%. De plus, le couplage production/purification a permis de s’affranchir du stockage de volumes importants de filtrat (7,2L de filtrat par jour de production en perfusion). Enfin, une etude de cout de production, a l’echelle « laboratoire », a ete realisee afin de determiner, en fonction de la productivite du clone et de la quantite d’anticorps a produire, la difference de rentabilite entre une production en batch ou en perfusion a differents CSPR. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01718307/document |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
