Loading...
Please wait, while we are loading the content...
Similar Documents
Les nouvelles approches de l'analyse multi-paramétrique en cytométrie de masse : caractérisation des cellules réservoirs du VIH
| Content Provider | Semantic Scholar |
|---|---|
| Author | Corneau, Aurélien |
| Copyright Year | 2018 |
| Abstract | La cytometrie de masse CMM) a revolutionne l'etude de la diversite cellulaire et phenotypique, en augmentant de maniere significative le nombre de marqueurs pouvant etre analyses simultanement (41 a ce jour). En permettant de definir precisement l'etat des populations de lymphocytes, notamment en ce qui concerne leur differenciation, activation et leur entree dans le cycle cellulaire, la CMM a mis au jour de petits sous-ensembles jusqu'ici inconnus. Dans cette etude, la CMM a ete utilisee pour tenter de mieux caracteriser les reservoirs du VIH. Avec l'introduction de la therapie antiretrovirale combinee (ART) en 1996, l'infection par le VIH est passee d'un destin fatal a une maladie chronique gerable avec une duree de vie normale grâce a une reduction de la replication virale active (la quantite de virus est en deca des limites de detection optimales). Cependant, si le traitement est interrompu, la charge virale chez le patient augmente a nouveau du fait des reservoirs de provirus viables localises dans des populations de cellules a longue duree de vie et qui ne peuvent pas etre eliminees par les traitements actuels. Ces cellules infectees reservoirs constituent un obstacle majeur a l'eradication du VIH. Le reservoir le mieux caracterise est celui des lymphocytes T CD4+ et est principalement heberge dans les TCM, les TTM, les TSCM et les Tfh. Une premiere etude nous a permis d’evaluer les stades du cycle cellulaire en association a des marqueurs de differenciation, d'activation et d'epuisement, pour aboutir a une evaluation poussee de l'etat de quiescence des lymphocytes T CD4 susceptibles d’abriter les reservoirs latents de VIH. Cette large analyse multiplexe demontre que certains sous-ensembles des LTCD4+CD25-HLA-DR- classiquement consideres "au repos"- contiennent en fait des quantites notables de cellules en cycle ou exprimant des recepteurs inhibiteurs, ouvrant de nouvelles voies pour une redefinition des cellules T CD4 quiescentes du sang peripherique. Une deuxieme etude avait pour but de definir les populations de LT CD4 produisant du VIH in vivo. Nous avons developpe une analyse multiparametrique sur des cellules de patients VIH+ sous ART et en phase d’interruption therapeutique (ATI). Cette etude met en evidence que les cellules CD3+CD4+CD32high expriment un fort taux de marqueurs d’activation et recoivent d’importants signaux d’activation via des cytokines, a l'inverse des cellules CD32a-. D'autre part, l'analyse des LTCD4+ producteurs de VIH (exprimant la proteine de capside p24), nous a permis de detecter un tres faible nombre de cellules positives p24+ (inferieur a 0,004% en phase d’ATI mais aucun avant). Le phenotype des cellules productrices a ensuite ete mis en evidence. Il s’agit de lymphocytes T n’exprimant pas de CD8, enrichis d’un facteur 4 en cellules TSCM, et d'un facteur 2 en TFH. Ces populations sont tres enrichies en cellules activees co-exprimant 3 marqueurs d’activation (augmentes d’un facteur 20) et sont en cycle (Ki67+) et/ou sur-expriment des molecules de controle immunitaire (ICP) avec un enrichissement d’un facteur 500. Ceci nous permet de detecter des cellules productrices avec des frequences beaucoup plus elevees dans ces populations TCD3+CD8- en cycle a hauteur de 0,08%, et en phase G2 (2,46%), mais egalement dans les cellules presentant une poly-expression des 4 immune-checkpoints (2,27%). L’avenement de la cytometrie de masse a augmente de facon exponentielle les informations que nous pouvions obtenir sur une cellule. Grâce a cet outil, l’identification du cycle cellulaire, en correlation avec differents marqueurs phenotypiques, permet d’explorer des informations jusque-la inaccessibles, entre autre l’analyse des reservoirs latents et productif du VIH. Ce travail permet ainsi de caracteriser le plus precisement possible ces cellules productrices de VIH, mais aussi les cellules latentes, et potentiellement reservoirs du virus. |
| File Format | PDF HTM / HTML |
| Alternate Webpage(s) | https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-02149652/document |
| Language | English |
| Access Restriction | Open |
| Content Type | Text |
| Resource Type | Article |
