Síntese, caracterização e avaliação da citotoxicidade da fibroína de seda associada à hidroxiapatita para potencial uso como biomaterial

Content Provider	Semantic Scholar
Author	Ferreira, Gabriely Coelho, Fernanda Cavicchioli, Maurício Specian, Sybele Saska Caminaga, Raquel Mantuaneli Scarel Ribeiro, Sidney José Lima Capote, T. S. O.
Copyright Year	2018
Abstract	Introducao: A fibroina de seda (FS) e uma proteina extraida do casulo do bicho da seda. Esse casulo e constituido, alem da fibroina, pela sericina, uma proteina hidrofilica que deve ser removida para assegurar sua biocompatibilidade, uma vez que sera utilizada em aplicacoes medicas. Para melhorar as propriedades mecânicas da FS, afim de desenvolver um biomaterial, podem ser incorporados compostos inorgânicos, como a hidroxiapatita (HA). Objetivo:Avaliar o processo de sintese da FS e sua associacao com HA, caracterizacao fisico-quimica do composito e analise da citotoxicidade do produto final (membranas de FS-HA).Metodologia: Para a sintese da FS foram utilizados casulos de Bombyxmori submetidos ao aquecimento com agua deionizada e NaCO3. Apos agitacao durante 30 minutos, foram lavados e secos em estufa por 24 h. A dissolucao da fibroina ocorreu por CaCl2 e dialisada por 48 h. Para a incorporacao de HA na FS, as membranas de FSforam imersas em etanol a 20% por 24 h e, posteriormente, foi-se alternando os ciclos de incubacao em solucao de CaCl2 (pH 5,8) e solucao de Na2HPO4(pH 9,1) a 25°C. As amostras foram secas a 50°C e esterilizadas por radiacao gama (20 kGy). As membranas FS-HA foram avaliadas por microscopia eletronica de varredura (MEV) e espectroscopia por dispersao de energia e raio X (EDS). A citotoxicidade foi realizada por meio do ensaio XTT, no qualcelulas CHO-K1 foram cultivadas (2×104) em placas de 24 pocos. O controle negativo (CN) foi constituido pelas celulas na ausencia das membranas. Para o controle positivo (CP), foi utilizado o cloridrato de doxorrubicina (3,0 µg/mL por 24 h). A absorbância obtida do teste XTT foi considerada proporcional ao numero de celulas viaveis. A analise estatistica foi realizada utilizando ANOVA seguida dos testes de Tukey e Dunnett. O nivel de significância foi de 5%. Resultados e discussao:A micrografia das superficies das membranas FS-HA revelaram cristais de HA de ordem nanometrica recobrindo a superficie da FS de forma homogenea e em algumas regioes ocorreu a deposicao aumentada dos cristais. Os dados do EDS mostraram que nas membranas FS-HA foi obtida uma razao molar Ca/P de 1,30, este valor obtido pode estar relacionado a um fosfato octacalcio.No ensaio XTT, a membrana FS-HA nao provocou diminuicao na viabilidade celular, porem houve reducao da mesma para a FS sem associacao, com diferenca estatisticamente significativa. Provavelmente a diminuicao da viabilidade celular se deu por conta da mudanca na estrutura secundaria da proteina fibroina, mudando de folha s (nao citotoxica) para a-helice (citotoxica), que pode ter ocorrido por acao de alguma energia mecânica durante o seu processamento. Conclusao: Concluiu-se que a FS isolada na forma de membrana promoveu citotoxicidade em celulas CHO-K1, enquanto a FS associada a HA nao diminuiu a viabilidade celular, mostrando-se mais adequada para o uso como biomaterial.
File Format	PDF HTM / HTML
Volume Number	39
Alternate Webpage(s)	http://seer.fcfar.unesp.br/rcfba/index.php/rcfba/article/download/866/544
Language	English
Access Restriction	Open
Content Type	Text
Resource Type	Article