[Large-scale enrichment and identification of human urinary N-glycoproteins/N-glycopeptides].

Content Provider	Europe PMC
Author	SHANG, Shiting DONG, Hangyan LI, Yuanyuan ZHANG, Wanjun LI, Hang QIN, Weijie QIAN, Xiaohong
Copyright Year	2021
Abstract	蛋白质的N-糖基化是真核细胞中一种重要的翻译后修饰,N-糖基化修饰在调控细胞黏附、迁移、信号转导及细胞凋亡等方面扮演着关键角色。蛋白质糖基化修饰的异常变化与多种重要疾病的发生相关。尿液具有蛋白质组复杂程度低和非入侵性等特点,适合大量及连续多时间点采样研究。但由于个体差异和生理条件的影响,尿蛋白丰度的生理波动较大。目前缺乏对健康人群尿液N-糖蛋白的个体差异和生理波动的专门性研究,以及生理丰度范围的构建,难以将个体差异、正常生理波动和疾病导致的变化进行有效区分,对疾病标志物研究提出很大挑战。本研究以亲水相互作用色谱法(HILIC)为基础,对该富集方法中活化、清洗与洗脱过程进行优化,其中主要对HILIC填料粒径和富集缓冲体系进行优化,并考察了不同实验条件下N-糖肽富集的鉴定数量、选择性与稳定性,发现当HILIC填料粒径为5 μm,在三氟乙酸富集体系下有更高的N-糖蛋白/N-糖肽鉴定水平。在此基础上,对20例健康男性志愿者和20例健康女性志愿者的尿液N-糖蛋白/N-糖肽进行了富集和定性、定量及功能分析。从40例尿液样本中共鉴定到1016个N-糖蛋白、2192条N-糖肽。采用非标定量策略对尿液N-糖肽的生理丰度波动范围进行了考察,尿液N-糖肽的丰度跨度约5个数量级。在此之后探索了健康人群尿蛋白N-糖基化水平的性别差异,筛选出性别相关的差异N-糖蛋白后进行了功能分析。统计学分析显示在尿液样本中性别可能是产生个体差异的重要因素。该工作为基于尿液糖蛋白质组学的功能与机制研究和临床生物标志物筛选提供了有力支撑。
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ISSN	10008713
Journal	Chinese Journal of Chromatography [Se Pu]
Volume Number	39
PubMed Central reference number	PMC9421575
Issue Number	7
PubMed reference number	34227365
DOI	10.3724/sp.j.1123.2021.01039
Language	English
Publisher	Editorial board of Chinese Journal of Chromatography
Publisher Date	2021-07-01
Publisher Place	No. 457, Zhongshan Road, Shahekou District, Dalian City, Liaoning Province(116023)
Access Restriction	Open
Rights License	本文是开放获取文章，遵循CC BY 4.0协议
Subject Keyword	亲水相互作用色谱法 生物质谱 糖蛋白质组 N-糖肽 富集 hydrophilic interaction chromatography (HILIC) biological mass spectrometry glycoproteome N-glycopeptide enrichment
Content Type	Text
Resource Type	Article
Subject	Organic Chemistry Analytical Chemistry Biochemistry Chemical Engineering Electrochemistry